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银染是目前最灵敏的非同位素蛋白质和核酸染色技术，对银染后的条带进行原位酶切（In-Gel Digestion）和后续MS分析是蛋白组学研究的重要手段。大量研究表明如果预先对银染条带进行去除银粒子的处理，则原位酶切更加有效，MS灵敏度更高。目前最常用的脱银粒子清除方法（如铁氰酸钾/硫代硫酸钠法、硫酸铜/硫代硫酸钠法）的主要缺点是引入的金属离子会影响后续反应、有的成分还有毒性（如铁氰酸钾）、工作液极不稳定。为克服这些缺点，本公司开发了无毒环保的新型银粒子清除剂。

• 高效，5分钟处理即可清除PAGE胶中银染留下的银粒子。
  
• 成分不含金属离子，跟原位酶切和质谱分析（包括MALDI-TOEMS）等后续反应高度兼容，脱银后PAGE胶还可以再次银染或考染。
  
• 成分无毒环保，保障研究人员和环境的安全。
  
• 既可用于蛋白质银染后的脱银，也可用于核酸银染后的脱银。
  
• 即开即用，使用非常方便，不需要配制各种溶液。

1. 实验前配制银染清除剂成分二工作液：将33μL银染清除剂成分二加入到1mL的银染清除剂成分一中混合均匀，现配现用。
   
2. 银染后，切下含所需蛋白条带的PAGE胶条用自备的去离子水摇晃浸泡2次，每次5分钟以去除电泳缓冲液。
   
   • 不要使用整块PAGE胶。
3. 用干净镊子将胶条转移到5～10mL的容器中（如5mL的塑料管或10mL的细菌培养管），加入1mL银染清除剂成分一，摇晃5分钟，去掉银染清除剂成分一。
   
4. 再加入1mL银染清除剂成分一，摇晃5分钟，去掉银染清除剂成分一。
   
5. 加入1mL银染清除剂成分二工作液，摇晃直到颜色脱去。
   
   • 一般不到20分钟，如不能退色需摇晃延长银染时间，直到退色为止。
6. 取出脱色后的胶条，在去离子水中摇晃浸泡二次，每次5分钟。
   
7. 胶条可以直接用于后续的再染色或质谱分析（需先甲酸酸化和脱水处理）。

8. 用1%甲酸浸泡脱银后的胶条2次，每次5分钟。
   
9. 用水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）浸泡5分钟。
   
10. 用乙腈浸泡5分钟。真空干燥去除残留水分。
    
11. 将胶条置于含8ng/μL Trypsin的25mM碳酸铵溶液中浸泡30分钟。
    
12. 去除多余溶液，加入20μL 25mM碳酸铵溶液，37℃保温8小时。
    
13. 加10μL 10%甲酸终止反应。收集溶液（含有酶解的蛋白产物）。
    
14. 用水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）浸泡10分钟，收集溶液。
    
15. 用乙腈浸泡10分钟，收集溶液。汇集上面三步收集的溶液，真空干燥。
    
16. 将干燥的多肽溶解于水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1）中，并1:1与10mg/mL的α-氰基-4-羟基肉桂酸溶液（α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid）混合，此溶液溶剂为水-乙腈-甲酸混合液（49.5:49.5:1），然后直接用于MALDI-TOFMS分析。